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石蠟包埋組織切片

點(diǎn)擊次數(shù):1210 更新時(shí)間:2016-02-17

用于福爾馬林固定的石蠟包埋組織切片:

1、抗原熱修復(fù) 可根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的具體條件,選用微波爐抗原修復(fù)、高壓鍋抗原修復(fù)或水浴高溫抗原修復(fù)??乖瓱嵝迯?fù)可選用各種緩沖液,如TBS、PBS、重金屬鹽溶液等,但實(shí)驗(yàn)證明,以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液(pH6.0)效果。請(qǐng)選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液(粉劑)配制,取該粉劑一包溶于1000ml的蒸餾水中,混勻,其pH值在6.0 ± 0.1,如因蒸餾水本身造成的pH值偏差,請(qǐng)自行調(diào)整。

(1)高壓熱修復(fù) 切片脫蠟至水。將1500ml~3000ml的0.01M緩沖溶液(pH6.0,工作液)或0.001M EDTA(pH8.0)注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上,放入鍋內(nèi),使切片位于液面以下,蓋鍋壓閥。當(dāng)壓力鍋開(kāi)始慢慢噴氣時(shí)(約加熱5~6分鐘后),計(jì)時(shí)1~2分鐘,然后將壓力鍋端離熱源,冷水沖至室溫后,取下氣閥,打開(kāi)鍋蓋,取出切片,蒸餾水洗后,PBS洗2分鐘×3,下接免疫組化染色步驟。

(2)煮沸熱修復(fù) 切片脫蠟至水后,放入盛有0.01M緩沖溶液(pH6.0,工作液)的容器中,并將此容器置于盛有一定數(shù)量自來(lái)水的大器皿中,電爐上加熱煮沸,從小容器的溫度到達(dá)92℃~98℃起開(kāi)始計(jì)時(shí)15~20分鐘,然后端離電爐,室溫冷卻20~30分鐘,蒸餾水沖洗,PBS洗,

(3)微波熱修復(fù)。切片脫蠟至水后,3%H2O2處理10分鐘,蒸餾水洗2分鐘×3。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液(工作液)的容器中,置微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持在92℃~98℃之間并持續(xù)10~15分鐘(注意:無(wú)論是使用醫(yī)用或家用微波爐,請(qǐng)根據(jù)具體機(jī)型酌情設(shè)置條件,務(wù)必滿足以上步驟中對(duì)溫度和時(shí)間的要求)。取出容器,室溫冷卻10~20分鐘(注意:不可將切片從緩沖液中取出冷卻,以便使蛋白能夠恢復(fù)原有的空間構(gòu)型)。PBS洗,下接免疫組化染色步驟。適用的抗原有:AR,Bax,Bcl-2,C-fos,X-jun,C-kit,C-myc,E-cadherin,Chromogranin A,Cyclin,ER,Heat shock protein,HPV,Ki-67,MDMZ,p53,p34,p16,p15,P-glycoprotein,PKC,PR,PCNA,ras,Rb,TopoismeraseⅡ等。

2、酶消化方法 常用0.1%和0.4%液。使用前預(yù)熱至37℃,切片也預(yù)熱至37℃,消化時(shí)間約為5~30分鐘(的zui終濃度可以根據(jù)使用者的要求進(jìn)行調(diào)整,濃度范圍可以從0.05%至0.25%); 消化37℃時(shí)間為30分鐘。皂素(Saponin):一般使用濃度為2~10mg/ml的saponin溶液,消化時(shí)間為室溫孵育30分鐘。 適用于被固定遮避的抗原,其中有:Collagen,Complement,Cytokeratin,C-erB-2,GFAP,LCA,LN等。

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