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顯色和比色在輪狀病毒Elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的影響

點(diǎn)擊次數(shù):1237 更新時間:2018-01-16

輪狀病毒Elisa試劑盒有著準(zhǔn)確性高、靈敏度高、特異性強(qiáng)等很多的優(yōu)點(diǎn),它在檢測抗體、抗原等方面有很好的應(yīng)用,深受廣大用戶朋友的喜愛。然而,在實(shí)驗(yàn)過程中,也需要注意很多問題,特別是顯色、比色問題。
elisa知識要點(diǎn)顯色和比色分析 
顯色 
    顯色是ELISA中的zui后一步溫育反應(yīng),此時酶催化無色的底物生成有色的產(chǎn)物。反應(yīng)的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi),陰性孔可保持無色,而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強(qiáng)。適當(dāng)提高溫度有助于加速顯色進(jìn)行。在定量測定中,加入底物后的反應(yīng)溫度和時間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測定的顯色可在室溫進(jìn)行,時間一般不需要嚴(yán)格控制,有時可根據(jù)陽性對照孔和陰性對照孔的顯色適當(dāng)縮短或延長反應(yīng)時間,及時判斷。
    OPD(鄰苯二胺)底物顯色一般在室外溫或37℃反應(yīng)20-30分鐘后即不再加深,再延長反應(yīng)時間,可使本底值增高。OPD底物液受光照會自行變色,顯色反應(yīng)應(yīng)避光進(jìn)行,ELISA試劑盒顯色反應(yīng)結(jié)束時加入終止液終止反應(yīng)。OPD產(chǎn)物用硫酸終止后,顯色由橙黃色轉(zhuǎn)向棕黃色。
    TMB(四甲基聯(lián)苯胺)受光照的影響不大,可在室溫中置于操作臺上,邊反應(yīng)觀察結(jié)果。但為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的穩(wěn)定性,宜在規(guī)定的適當(dāng)時間閱讀結(jié)果。TMB經(jīng)HRP作用后,約40分鐘顯色達(dá),隨即逐漸減弱,至2小時后即可*消退至無色。TMB的終止液有多種,疊氮鈉和十二烷基硫酸鈉(SDS)等酶抑制劑均可使反應(yīng)終止。這類終止劑尚能使藍(lán)色維持較長時間(12-24小時)不褪,是目視判斷的良好終止劑。此外,各類酸性終止液則會使藍(lán)色轉(zhuǎn)變成黃色,此時可用特定的波長(450nm)測讀吸光值。

比色 
    比色前應(yīng)先用潔凈的吸水紙拭干板底附著的液體,然后將板正確放入酶標(biāo)比色儀的比色架中。以軟板為載體的試驗(yàn),需先將板置于標(biāo)準(zhǔn)96孔的座架中,才可進(jìn)行比色。在加底物液顯色前,先將軟板邊緣剪凈,這樣,此板就可*平妥坐入座架中。
    比色時應(yīng)先以蒸餾水校零點(diǎn),測讀底物孔(未經(jīng)任何反應(yīng)僅加底物液的孔)和空白孔(以生理鹽水或稀釋液代替標(biāo)本作全過程的孔),以記錄本次試驗(yàn)的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點(diǎn),以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度,然后進(jìn)行計(jì)算。
    輪狀病毒Elisa試劑盒比色結(jié)果的表達(dá)以往通用光密度(oplical density,OD),現(xiàn)按規(guī)定用吸光度(absorbence,A),兩者含義相同。通常的表示方法是,將吸收波長寫于A字母的右下角,如OPD的吸收波長為492nm,表示方法為“A492nm"或“OD492nm"。
72-40-2        相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
73851-70-4         相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
73963-62-9        相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
76350-28-2         碘普羅胺相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
7636-26-2         3-甲氧基標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
76801-93-9         相關(guān)化合物B標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
76801-93-9         碘氟醇相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
80047-24-1         相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
80139-91-9         左卡巴斯汀相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品    50mg
輪狀病毒Elisa試劑盒

 

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