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大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1復蘇操作流程

點擊次數:777 更新時間:2021-07-13

大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-1復蘇操作流程:

1. 準備工作,開水浴鍋,預熱試劑,超凈工作臺紫外照射 30min,找到對應細胞在液氮罐中的位置
2. 紫外照射后風機吹 10min 后,酒精擦拭臺面,放入試劑和離心管,取 15ml 離心管,加入 9ml 培養(yǎng)液
3. 在液氮罐中取出細胞,先擰松放液氮,再擰緊,將凍存管放入 PE 手套中,然后水浴融化后取出,1-2min
4. 將凍存管噴酒精后放入超凈臺內,擦干管壁,用 1ml 頭將細胞轉移到已加培養(yǎng)液的離心管中
5. 800-1000rpm 離心 5min,注意配平
6. 將離心好的細胞棄上清,加入 5ml *培養(yǎng)基重懸,用移液管吹打 8-10 次, 避免產生氣泡,將細胞懸液接種到 10cm 培養(yǎng)皿中,補加 5ml 培養(yǎng)液
7. 混勻,十字法或者 8 字法
8. 將混好的細胞放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 冷凍保存方法一:冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽儲存。
冷凍保存方法二:冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下,再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,但存活率稍微降低一些。

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